Indhold
Escherichia coli, E. coli, er en bakterie, der vokser i de nedre tarme hos pattedyr. Denne bakterie blev først opdaget i slutningen af 1800-tallet. Siden da har den haft en lang historie med brug i videnskabelig forskning. Det er den mest anvendte organisme inden for molekylær genetik. En del af grunden til, at E. coli ofte bruges i videnskabelig forskning, er, at det er let at dyrke i et laboratorium. De faktorer, der gør E. coli let at dyrke er dens enkle ernæringsbehov, hurtige vækstrate og dens moderate vedligeholdelsesbehov.
Steriliser inokuleringssløjfen ved at placere den i Bunsen-brænderens flamme. Før den nederste halvdel af løkken gennem flammen, indtil den lyser rødt.
Lad løkken afkøle. Du kan røre den til den sterile agar på pladen for at sikre dig, at den er kølet af. Anbring ikke sløjfen på bordet, og lad den ikke komme i kontakt med andet end steril agar eller den ønskede kultur, nu når den er steriliseret.
Dyp løkken i E. coli-kulturen, og fjern den derefter.
Åbn agarpladen, og skub forsigtigt løkken frem og tilbage over overfladen på en sektion af agaren. Pas på ikke at ridse gennem agaren med løkken. Agaren giver de næringsstoffer, som E. coli har brug for at vokse.
Placer sløjfen i Bunsen-brænderflammen igen for at sterilisere den. Når løkken stangen er afkølet, skal du røre den til et sterilt afsnit af pladen for at sikre dig, at den er kølig, og derefter skubbe løkken gennem din første streg for at lave en anden streg. Denne anden streg er en fortyndet version af den første streg. Gentag denne steriliserings- og glideproces, indtil flere sektioner af agarpladen er blevet glidet over. Årsagen til, at du gør dette, er, at du senere kan vælge mellem enkle, klonale kolonier. Dette vil hjælpe med at sikre, at du har mindst en sektion, der har individuelle kolonier - ikke for koncentreret (som vil have for meget vækst og ikke tillade dig at vælge fra en enkelt koloni) og ikke for fortyndet (hvilket ikke giver nogen kolonier) .
Steriliser løkken i flammen en sidste gang, inden den lægges til side i arbejdsområdet.
Sæt toppen tilbage på agarpladen. Vend pladen på hovedet, og anbring den i inkubatoren indstillet til 37 grader Celsius (98,6 grader Fahrenheit). Denne ideelle inkuberingstemperatur simulerer temperaturen i den menneskelige krop, hvor E. coli er bosiddende. Inden for 24 til 48 timer vises synlige kolonier af E. coli-bakterier i agarpladen.