Indhold
Biokemi studerer molekyler såsom DNA, RNA og proteiner. Blotting teknikker er, hvad forskere bruger til at adskille disse typer molekyler. I celler findes de som en blanding. Blotting giver forskere mulighed for at finde et protein blandt mange, som en nål i en høstak. Blotting udføres generelt ved at lade en blanding af DNA, RNA eller protein strømme gennem en gelplade. Denne gel tillader små molekyler at bevæge sig hurtigere end større. De adskilte molekyler presses derefter mod en membran, hvilket hjælper med at flytte molekylerne fra gelen på membranen. Molekylerne klæber til membranen, men forbliver på samme sted, bortset fra hinanden, som om de stadig var i gelen.
Western Blot
Western blotting er en almindelig teknik til at separere proteiner efter størrelse, men i lige søjler. Disse parallelle søjler gør det muligt for forskere at sammenligne mængden af et protein på tværs af forskellige prøver, der køres lige ved siden af hinanden, som bowlingbaner. For eksempel, hvis du testede virkningen af forskellige mængder af et lægemiddel på cellevækst, ville du behandle fire forskellige grupper af celler med en anden mængde medikament. Derefter kunne du bryde cellerne åbne og køre proteinerne fra hver gruppe i separate baner på en gel. At sprede proteinerne ud på denne måde giver dig mulighed for at se, hvad en stigende koncentration af lægemidler gør med et bestemt protein.
Northern Blot
Northern blotting bruges til at detektere RNA. Celler kan brydes åbne for at frigive deres RNA. RNA fra forskellige celletyper kan køres på separate baner på en gel. Gelen spreder det forskellige RNA efter størrelse. Disse pæne, parallelle rækker af RNA tillader en forsker at sammenligne, hvilken celletype der har hvor meget af hvilket RNA. Denne metode tillader en forsker at bestemme, om celler fra en bestemt sygdom har mere af dette RNA eller mindre af det RNA. Northern blotting kan afsløre, hvordan en sygdom fungerer på RNA-produktionsniveauet.
Sydblot
Sydlig blotting er den originale blotting-teknik, der startede navnesystemet. Det blev opfundet af Edwin Southern. Southern blot bruges til at detektere mængden af DNA i en blanding. Ligesom med protein og RNA kan en cells DNA frigøres, når denne celle brydes op. Sydlig blotting adskiller DNA fra forskellige celletyper efter størrelse. DNA fra hver prøve spredes i pæne, parallelle baner. Individuelle stykker DNA kan påvises ved hjælp af en radioaktiv eller fluorescerende sonde, der kun er designet til at binde til det stykke DNA. Energisignalet fra en radioaktiv sonde eller lysglimt fra et fluorescerende signal fortæller forskere, hvor meget af det stykke DNA, der er i hver prøve.
Andre blots
De tre vigtigste blotting-teknikker - vestlige, nordlige og sydlige - er blevet ændret på forskellige måder for at detektere lidt forskellige molekyler. Western blot vs Southern blot, for eksempel. detekterer henholdsvis protein og DNA. Hver modificeret teknik udføres generelt på den sædvanlige måde, men bruger en anden metode til at detektere molekylet, der spreder sig ud i de parallelle baner. Southwestern blots detekterer molekyler af protein, der sidder fast på DNA. Nordvestlige blotter detekterer molekyler af protein, der er fastgjort til RNA. Farvestlige blots detekterer molekyler af protein, der er klæbet til andre proteiner.