Indhold
Forskere bruger serielle fortyndinger (en serie på 1:10 fortyndinger) til at beregne befolkningstætheden i bakteriekulturer. Når en dråbe kultur indeholdende et lille antal bakterier er udpladet og inkuberet, vil hver celle teoretisk være langt nok væk fra andre celler til at den danner sin egen koloni. (I virkeligheden kan nogle kolonier være efterkommere af to celler i nærheden, men dette er sjældent i fortyndede kulturer, og antallet af kolonier er således et meget godt estimat af antallet af celler, der oprindeligt blev overført til pladen.) Fordi befolkningstætheden er ukendt, skal der anvendes en række fortyndinger for at ende med en plade med et passende antal kolonier.
Seriefortyndinger
Mærk de seks prøverør (der hver indeholder 9 ml vækstmedier) som 1 til 6. Mærk de seks agarplader som 1 til 6. Brug en pipetter og steril 1 ml pipettespidser til at overføre 1 ml bakteriekultur til røret 1.
Bland godt, og overfør 1 ml fra rør 1 til rør 2 ved hjælp af en pipetter og sterile 1 ml spidser.
Gentag trin 2 for de resterende rør, hver gang du overfører 1 ml fra det senest anvendte rør til det næste rør.
Brug en pipetter og sterile 0,1 ml spidser til at overføre 0,1 ml fra rør 1 til en agarplade. Flamme en L-formet glasstang, og brug den til at sprede dråbet jævnt rundt om pladen. Inkuber pladen i 48 timer ved en passende temperatur til de anvendte bakterier. Forskellige typer bakterier har forskellige optimale væksttemperaturer. Hvis du ikke kan finde den optimale væksttemperatur ved hjælp af referencemateriale, kan du prøve at inkubere pladerne ved 25 og 37 grader.
Gentag trin 4, hver gang du overfører væske fra et andet reagensglas til dets tilsvarende plade.
Befolkningsberegninger
Overhold de seks plader, og vælg en med 30 til 200 isolerede kolonier.
Multiplicer antallet af kolonier på pladen med 10 for at beregne antallet af celler pr. Ml kultur fra det anvendte fortyndingsrør.
Multiplicer antallet fra trin 2 med 10 ^ (pladenummer) for at beregne antallet af celler pr. Ml original kultur. Værdien af 10 ^ (pladenummer) er fortyndingsfaktoren for den kultur, der bruges til at inokulere den plade.