Indhold
Bakterier dyrkes i petriskåle på et fast medium kendt som bakteriel agar, hvor der opstår cirkulære kolonier. I modsætning til en individuel bakteriecelle er en koloni en gruppe af bakterier, der er store nok til at være synlige for det blotte øje. Bakterievækst kan måles ved simpel observation af hvor mange kolonier der er til stede; mere kvantitative metoder inkluderer imidlertid anvendelsen af et tællekammer, eller oftere levedygtige pladetællinger. Sidstnævnte anvendes hyppigst, da det også giver kvalitativ information, såsom effekten af forskellige vækstbetingelser. Da der muligvis er milliarder af bakterier i en petriskål, kræver det først at måle at fortynde prøven, så det er muligt at tælle antallet af kolonier.
I et reagensglas tilsættes 10 mikroliter af den startende bakteriekultur til 90 mikroliter fortyndingsmedium. Luk rørets låg tæt og hvirvel forsigtigt for at opnå en homogen blanding. Nu er prøven en tiendedel af dens oprindelige koncentration.
Overfør 10 mikroliter af denne nye prøve til et nyt reagensglas, der indeholder 90 mikroliter fortyndingsmedium, bland det igen. Endnu en gang vil resultatet blive prøven yderligere fortyndet - nu udgør den hundredeedel af dens oprindelige koncentration. Gentag dette flere gange, indtil den originale prøve er fortyndet mellem 104 og 1010 gange. Sørg for, at hvert rør er mærket med den rigtige fortynding, for eksempel 10-1, 10-2 og så videre.
Disponer 10 mikroliter af den sidste fortynding afsluttet på agarpladen. Distribuer bakterieopløsningen over hele overfladen af agarpladen ved hjælp af spredningskanten. Gentag dette for to plader til. Det er også almindeligt at udføre disse trin med andre niveauer af fortynding til sammenligning. Sørg for at mærke pladernes bund. Udskift lågene på hver plade, og lad agarpladerne tørre i flere minutter, enten på en laboratoriebænk under en flamme eller i en inkubator. Placer pladerne i inkubatoren, som skal indstilles til den passende temperatur for bakteriestammen. Lad det vokse i 12 til 16 timer.
Kolonier skal være synlige efter 16 timer; nogle genetiske modifikationer kan dog kræve længere tid (for eksempel farveudvikling). Når kolonier kan observeres, skal du tage pladerne ud og finde dem, der har mellem 30 og 300 kolonier. Brug en permanent markør til at placere en prik i bunden af petriskålen - siden med agaren, ikke låget - uanset hvor en koloni er synlig gennem agaren. Tæl hver markørprik. Gentag for hver skål.
For at måle mængden af bakterier i startkulturen for dette eksperiment skal fortyndingen vendes i beregningerne to steder. For det første, når du tog en mikroliter fra reagensglasset for at lægge petriskålen, tog du en tiendedel af den fortyndede prøve, så du skal multiplicere alt med 10 for at vende det. Hvis fortyndingsfaktoren i reagensglasset for eksempel var 10-7 , så skal antallet af kolonier ganges med 107 for at vende fortyndingseffekten. Fjern blot det negative tegn fra eksponenten i beregningerne. Brug formlen:
× 10 × = Antal kolonidannende enheder (CFU) pr. Ml startkultur. Dette er bakterievæksten i dine petriskåle.