Indhold
Selvom de ikke kan ses med det blotte øje, er bakterier overalt. De findes i mad, jord, vand, overflader i vores hjem og i og på vores kroppe. Bakterier findes generelt i blandede populationer. Isolering af en specifik bakterie fra andre bakteriearter i en given prøve giver mikrobiologer mulighed for at undersøge dens struktur og funktion, egenskaber, der er anvendt i dens identifikation. Mikrobiologer isolerer ofte bakterier ved hjælp af en af flere stribepladeteknikker.
Værktøj
En inokuleringssløjfe bruges til at overføre mikroorganismer. Det består af en nichrome eller platinatråd med en lille, cirkulær løkke i den ene ende. Den anden ende er lige og glider ind i et håndtag. Engangsindsprøjtningssløjfer af plast er også tilgængelige. Bakterier kan kun isoleres, hvis de vokser. Mikrobiologer dyrker bakterier til isolering af stribplader i lavvandede, runde petriskåle fyldt med et fast medium, kaldet agar. Agar efterligner miljøet, hvor bakterierne naturligt vokser. De mediefyldte skåle er sterile og låg for at forhindre vækst af uønskede organismer. Under isolering af stribepladen steriliseres inokuleringssløjfen gentagne gange i flammen af en Bunsen-brænder.
Princip
Stregplade-teknikken er den mest populære metode til isolering af specifikke bakterier fra en prøve, der indeholder en blanding af mikroorganismer. Teknikken fortynder i det væsentlige antallet af organismer og reducerer deres tæthed. Det giver mikrobiologer mulighed for at skelne og isolere individuelle bakteriekolonier. En koloni er en synlig klynge af bakterier. Alle bakterierne i en enkelt koloni stammer fra den samme bakteriecelle. Derfor er individuelle kolonier ”rene” kolonier. Den rene koloni overføres til en anden plade for at producere en ren kultur bestående af en type bakterier.
Procedure
Når det gøres ordentligt, isolerer stregpladeisolering en prøve og gør det muligt for individuelle bakterieceller at udvikle sig til isolerede kolonier. En mikrobiolog begynder med at sterilisere inokuleringssløjfen i en flamme. Hun afkøler løkken ved at røre den til agaren, dypper derefter løkken i prøven og spreder den frem og tilbage for at dække et afsnit af pladen. Hun steriliserer løkken, afkøler den og inokulerer en anden, tilstødende sektion af pladen ved at trække løkken gennem det første afsnit flere gange og dække den anden sektion ved hjælp af en zigzag-bevægelse. Dette samler et lille antal bakterier fra det første afsnit og overfører dem til det andet afsnit. Antallet af gange, denne grundlæggende procedure gentages, afhænger af den anvendte stregplade-metode. På trods af metoden bruges den originale prøve kun til inokulering af den første sektion af pladen.
Streak Plate Metode
Streak plate-metoder varierer med antallet af stribede agarsektioner. T-streak-metoden bruger tre sektioner: den øverste halvdel og to lige store størrelser i bunden. Den oprindelige inokulum anbringes i pladens øverste halvdel. Bakterier trækkes fra det øverste afsnit til et af de nederste sektioner, derefter fra det nederste afsnit til det andet. I kvadrantmetoden er fire sektioner af lige store størrelse stribet. Den kontinuerlige stribningsmetode involverer typisk at inokulere den øverste halvdel af pladen, dreje den 180 grader og inokulere den anden halvdel af pladen uden at sterilisere løkken eller trække bakterier fra det foregående afsnit.